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微柱凝膠技術(shù)

分類：產(chǎn)品知識(shí)
作者：
來源：
發(fā)布時(shí)間：2021-12-03
訪問量：0

【概要描述】微柱凝膠技術(shù)是液相技術(shù)與固相技術(shù)的巧妙組合，是凝膠過濾技術(shù)、離心技術(shù)、紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)技術(shù)（特異性抗體抗原反應(yīng)）的結(jié)合。通過對(duì)凝膠種類的選擇和凝膠濃度的調(diào)節(jié)來控制分子篩孔徑大小，使分子篩只允許游離紅細(xì)胞通過，從而達(dá)到分辯凝集紅細(xì)胞和非凝集紅細(xì)胞的目的。微柱凝膠技術(shù)是目前大規(guī)模推廣、適于常規(guī)試驗(yàn)的血型血清學(xué)試驗(yàn)技術(shù)。

微柱凝膠技術(shù)

分類：產(chǎn)品知識(shí)
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發(fā)布時(shí)間：2021-12-03
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詳情

一。何為微柱凝膠技術(shù)

微柱凝膠技術(shù)是液相技術(shù)與固相技術(shù)的巧妙組合，是凝膠過濾技術(shù)、離心技術(shù)、紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)技術(shù)（特異性抗體抗原反應(yīng)）的結(jié)合。通過對(duì)凝膠種類的選擇和凝膠濃度的調(diào)節(jié)來控制分子篩孔徑大小，使分子篩只允許游離紅細(xì)胞通過，從而達(dá)到分辯凝集紅細(xì)胞和非凝集紅細(xì)胞的目的。微柱凝膠技術(shù)是目前大規(guī)模推廣、適于常規(guī)試驗(yàn)的血型血清學(xué)試驗(yàn)技術(shù)。

二。微柱凝膠種類

1. 中性膠（又稱空白膠，僅含有葡聚糖凝膠）：用做檢測(cè)IgM抗體與相應(yīng)抗原紅細(xì)胞的反應(yīng)；

2. 特異性膠（如加入抗-A、抗-B、抗-D等特異性抗體的凝膠）：利用包被的抗體檢測(cè)相應(yīng)抗原；

3. 抗人球蛋白膠（包被了單特異性或多特異性抗人球蛋白試劑的凝膠）：用于檢測(cè)IgG抗體與相應(yīng)抗原紅細(xì)胞的反應(yīng)。

三。微柱凝膠技術(shù)反應(yīng)原理

當(dāng)抗原抗體反應(yīng)時(shí)紅細(xì)胞發(fā)生凝集（包括已致敏的紅細(xì)胞通過抗人球蛋白的橋聯(lián)作用發(fā)生的凝集），在一定的離心力作用下，凝集的紅細(xì)胞不能通過凝膠間隙而留在凝膠管上層或分散在凝膠管中，此為陽性反應(yīng)；而未凝集的紅細(xì)胞在離心力的作用下可通過凝膠間隙而沉積于凝膠管的底部，此為陰性反應(yīng)。

四。微柱凝膠卡的設(shè)計(jì)

1. 每卡有6孔或8孔不等，國內(nèi)產(chǎn)品目前均為6孔；

2. 每孔根據(jù)不同用途，采用不同設(shè)計(jì)。每孔加入的可以是中性膠、特異性膠或抗人球蛋白膠；

3. 每孔有反應(yīng)腔和凝膠兩部分。

五。微柱凝膠技術(shù)的用途

1. 患者血型鑒定

2. 患者輸血前或孕婦抗體篩選

3. 抗體特異性鑒定

4. 交叉配血試驗(yàn)

5. 藥物性免疫性溶血性貧血及自身免疫性溶血性貧血等疾病免疫性血清學(xué)檢測(cè)

六。微柱凝膠卡離心時(shí)間及離心轉(zhuǎn)速設(shè)計(jì)

不同廠家根據(jù)使用的凝膠種類、濃度、儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)結(jié)果而采用不同的設(shè)計(jì)方案，每家的方案無疑是針對(duì)自己的產(chǎn)品所設(shè)計(jì)的離心時(shí)間和轉(zhuǎn)速。我公司的是：900rpm/min，離心2min ，1500rpm/min，離心3min ，兩個(gè)不同轉(zhuǎn)速間自動(dòng)變速。

七。微柱凝膠技術(shù)結(jié)果判讀

4+ 離心后，紅細(xì)胞成線條狀停留在凝膠管表層；

3+ 離心后，大部分紅細(xì)胞停留在凝膠管表面，少部分降至凝膠管中上部；

2+ 離心后，大部分紅細(xì)胞位于凝膠管中部，少部分位于凝膠管中上部；

1+ 離心后，紅細(xì)胞位于凝膠管下部近底部處；

± 與同卡內(nèi)陰性對(duì)照做比對(duì)，如與陰性對(duì)照有差別，凝膠卡判為±，為弱反應(yīng)；如與陰性結(jié)果一致，可判為陰性；

0 離心后，紅細(xì)胞完全沉積于凝膠管底部；

M 為混合反應(yīng)表示，指有部分紅細(xì)胞居于凝膠管表面或凝膠管內(nèi)，而另一部分紅細(xì)胞則沉積于管底部；

H 為溶血反應(yīng)表示，指反應(yīng)腔內(nèi)液體呈清澈透明紅色，表示出現(xiàn)紅細(xì)胞溶血。完全溶血為凝膠管內(nèi)完全無凝集及未凝集紅細(xì)胞存在；不完全溶血指仍有殘留的紅細(xì)胞存在于凝膠管表面、中間或底部。

八。為什么微柱凝膠法不用洗滌紅細(xì)胞？

由于凝膠管中的抗人球蛋白與反應(yīng)腔中的血清處于兩相中，又加之互不擴(kuò)散，因而互不接觸，不存在血清球蛋白中和消耗抗人球蛋白的問題。當(dāng)離心時(shí)，相鄰的單紅細(xì)胞免疫復(fù)合物（被IgG抗體致敏的紅細(xì)胞）在通過凝膠管時(shí)因抗人球蛋白的橋聯(lián)作用而出現(xiàn)凝集，而血清中的剩余球蛋白卻因?yàn)樵谙嗤碾x心力下仍舊停留在反應(yīng)腔中，不能和抗人球蛋白結(jié)合。紅細(xì)胞沉降所需離心力一般不足100g,而血清蛋白分子沉降的離心力至少需要3000g。

九。微柱凝膠技術(shù)中假陽性的原因及處理方法

1. 血清中高纖維蛋白引起的紅細(xì)胞沉降受阻。血樣經(jīng)重新離心及紅細(xì)胞洗滌后重新試驗(yàn)。

2. 血清或紅細(xì)胞被細(xì)菌污染，也會(huì)產(chǎn)生假陽性結(jié)果。取新鮮血標(biāo)本重新試驗(yàn)。

3. 破碎紅細(xì)胞的細(xì)胞膜浮著于凝膠管表面或中間。取新鮮血標(biāo)本重新試驗(yàn)。

4. 試驗(yàn)時(shí)溫度過低，凝膠顆粒活動(dòng)性減少，致單個(gè)紅細(xì)胞穿過凝膠顆粒時(shí)發(fā)生困難。將微柱凝膠卡經(jīng)適當(dāng)時(shí)間復(fù)溫后重新試驗(yàn)或?qū)⒃囼?yàn)置37℃進(jìn)行。

5. 紅細(xì)胞表面有補(bǔ)體致敏，在使用多特異性抗人球蛋白試劑進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)會(huì)出現(xiàn)陽性結(jié)果。建議使用抗-IgG抗人球蛋白試劑重新試驗(yàn)。

6. 假凝集、自身凝集都會(huì)使微柱凝膠試驗(yàn)中出現(xiàn)假陽性。假凝集由某些疾病、使用某些藥物、輸注某些高滲或高蛋白溶液引起。須將紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌后重新試驗(yàn)，自身凝集多為冷自身抗體引起，通過加溫處理或在37℃進(jìn)行試驗(yàn)可以避免自身凝集干擾。也可用DTT或2-ME將紅細(xì)胞處理（破壞引起自身凝集的IgM 抗體）后重新試驗(yàn)。

7. 離心機(jī)離心轉(zhuǎn)速顯示錯(cuò)誤（實(shí)際轉(zhuǎn)速低于顯示轉(zhuǎn)速），離心機(jī)轉(zhuǎn)子在離心時(shí)發(fā)生位置偏移。離心機(jī)要定期測(cè)速調(diào)速，離心前轉(zhuǎn)子要固定到位

十。微柱凝膠技術(shù)中假陰性的原因及處理方法

1. 抗體抗原比例不當(dāng)，抗體過?；蚩乖^剩導(dǎo)致前帶現(xiàn)象或后帶現(xiàn)象的發(fā)生。嚴(yán)格按規(guī)程要求操作可杜絕此類現(xiàn)象發(fā)生。

2. 受檢者血清抗體太少太弱，或紅細(xì)胞抗原太少太弱。原因可能是血標(biāo)本放置時(shí)間過久，或存放不當(dāng)，或受檢者抗原抗體本身就很弱（遺傳原因，如亞型；疾病原因，如某些白血病患者）。取新鮮血標(biāo)本重新試驗(yàn)，至于受檢者本身抗體抗原很弱的病例，根據(jù)具體情況，可采用正反定型、亞型鑒定、吸收釋放試驗(yàn)、血型物質(zhì)測(cè)定及家庭情況調(diào)查等方法加以鑒別。

3. 抗體試劑問題，存放過久或存放不當(dāng)導(dǎo)致抗體效價(jià)失效。更換抗體試劑重新試驗(yàn)，并增加對(duì)照試驗(yàn)。

4. 操作錯(cuò)誤，未加入或加錯(cuò)抗體試劑，加入反應(yīng)物后孵育時(shí)間太短或根本未經(jīng)孵育。杜絕方法：操作要認(rèn)真，核對(duì)要仔細(xì)，嚴(yán)格按操作程序進(jìn)行操作。

十一。使用微柱凝膠技術(shù)注意事項(xiàng)

1. 微柱凝膠卡要垂直平穩(wěn)放于18℃～25℃條件下，避免重物擠壓，避免陽光直射，遠(yuǎn)離熱源，并保持一定的濕度。防止溫度過高，濕度過低導(dǎo)致凝膠脫水、干涸。也要防止溫度過低，導(dǎo)致凝膠顆粒濃縮變形，柔滑度變低，凝膠顆粒間隙變小，使單個(gè)紅細(xì)胞的通過受阻，影響試驗(yàn)結(jié)果；

2. 試驗(yàn)前將微柱凝膠卡置專用離心機(jī)上離心數(shù)分鐘，使因搬運(yùn)、震動(dòng)而移動(dòng)的凝面恢復(fù)至水平位置；

3. 向反應(yīng)腔內(nèi)加樣必須先加紅細(xì)胞后再加抗體試劑（血清或分型抗體試劑）；

4. 紅細(xì)胞不用洗滌，可直接從紅細(xì)胞層吸取一定量的壓積紅細(xì)胞，用LISS溶液或生理鹽水稀釋液配制成所需濃度的懸液；

5. 用于配制紅細(xì)胞懸液的稀釋液在冰箱取出后必須先行復(fù)溫，再行配制紅細(xì)胞懸液，防止冷凝集現(xiàn)象發(fā)生，影響試驗(yàn)結(jié)果；

6. 加樣量和紅細(xì)胞懸液濃度應(yīng)嚴(yán)格按操作說明書執(zhí)行；

7. 加樣時(shí)一定要加至微柱凝膠卡反應(yīng)腔內(nèi)。目的是避免抗體與抗原不能充分結(jié)合，也為了防止氣泡形成，影響試驗(yàn)結(jié)果；

8. 出現(xiàn)干膠、氣泡或封條損壞現(xiàn)象時(shí)，不得再繼續(xù)使用；

9. 該技術(shù)一般不用于抗體效價(jià)測(cè)定。

十二。微柱凝膠技術(shù)的特點(diǎn)：

1. 簡便快速：紅細(xì)胞不用洗滌，簡化了試驗(yàn)程序，縮短了試驗(yàn)時(shí)間。孵育時(shí)間較試管法起碼縮短了15分鐘；

2. 準(zhǔn)確：結(jié)果清晰明了，重復(fù)性好；

3. 敏感：敏感性高于試管法10倍左右，且恰到好處，很少有假陽性出現(xiàn)；

4. 標(biāo)本用量少：標(biāo)本用量為試管法的1/10～1/5，有利于新生兒及某些標(biāo)本難采集的患者的血標(biāo)本的檢測(cè)；

5. 操作加樣標(biāo)準(zhǔn)化：試驗(yàn)全過程及結(jié)果判讀均易于規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化；

6. 生物安全防護(hù)好：操作簡便、規(guī)范，大大減少了操作者與血液標(biāo)本接觸的機(jī)會(huì)，降低了醫(yī)療源性傳染的危險(xiǎn)；

7. 保存時(shí)間長：檢測(cè)完后反應(yīng)格局在室溫條件下可保存數(shù)天，甚至數(shù)周不發(fā)生變化。還可將其拍照長期保存。

十三。微柱凝膠試驗(yàn)技術(shù)分類

1. 微柱凝膠直接血凝試驗(yàn)：是指在含有中性膠的微柱凝膠卡反應(yīng)腔內(nèi)加入紅細(xì)胞抗體試劑（或血清）和紅細(xì)胞后，直接離心觀察判定結(jié)果。如ABO血型鑒定，采用IgM抗體對(duì)RhD及其他抗原的檢測(cè)；

2. 微柱凝膠抗人球蛋白試驗(yàn)：一是指將受檢者紅細(xì)胞洗滌后加入微柱凝膠卡反應(yīng)腔內(nèi)，直接離心觀察判定結(jié)果。此為直接抗人球蛋白試驗(yàn)；二是指在含有抗人球蛋白膠的微柱凝膠卡反應(yīng)腔內(nèi)加入已知特異性IgG抗體（或已知抗原紅細(xì)胞）及受檢紅細(xì)胞（或受檢血清），按規(guī)定37℃孵育一定時(shí)間后，離心觀察判定結(jié)果，此為間接抗人球蛋白試驗(yàn)；

3. 微柱凝膠間接血凝試驗(yàn)：是指紅細(xì)胞膜事先包被有抗原或抗體后加入含抗人球蛋白

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